Informație

De ce celulele epiteliale se opresc ca răspuns la ser?


Celulele epiteliale primare, de exemplu epiteliul mamar uman, nu reușesc să prolifereze (se opresc) în mediu care conține ser. Prin urmare, un mediu de creștere comun pentru epiteliu conține extract hipofizar în loc de ser (Hammond și colab., 1984). Acest lucru poate fi legat de faptul că epiteliul nu este în mod normal în contact cu serul din organism.

Pe de altă parte, multe linii celulare asemănătoare epiteliului cresc bine în ser și majoritatea liniilor celulare derivate din tumori sunt cultivate în acest fel. Dar poate fi dificil să se stabilească astfel de linii din cancerele epiteliale: adesea, numai fibroblastele cresc din explantele tumorale în mediu care conține ser, în timp ce celulele canceroase (epiteliale) nu. Spre deosebire de epiteliu, fibroblastele își cresc proliferarea atunci când sunt expuse serului, iar acest proces este bine studiat (Iyer și colab., 1999).

  1. De ce epiteliul se oprește ca răspuns la ser? Se cunosc mecanisme? Există vreun studiu al răspunsului la exprimarea genei epiteliului la nivelul serului? De ce este comportamentul epiteliului atât de diferit de cel al fibroblastelor --- există o explicație fiziologică, poate legată de vindecarea rănilor?

  2. Este adevărat acest lucru pentru toate tipurile de epiteliu (uman)?

  3. Ar trebui să considerăm că celulele asemănătoare epiteliului care cresc în ser sunt adaptate / selectate? Au pierdut astfel astfel de linii celulare o parte din fenotipul epitelial? Este acesta un artefact serios?

Orice indicație către literatură ar fi apreciată!


TGF-beta ar fi un candidat bun. Pentru a cita: "TGF-β inhibă progresia G1 / S într-o varietate de tipuri de celule eucariote. Dintre acestea, celulele epiteliale netransformate sunt deosebit de sensibile la inhibarea creșterii de către TGF-β." http://genesdev.cshlp.org/content/14/24/3093.full

Serul bovin fetal (FBS) conține un nivel ridicat de TGF-β latent. Serul uman are, de asemenea, un nivel ridicat de TGF-beta (20-50ng / ml)

De asemenea, este posibil ca oprirea creșterii să facă parte din inducerea diferențierii terminale de factorii serici, cum ar fi TGFb. "Factorul de creștere de tip beta transformator este factorul seric primar care induce diferențierea pentru celulele epiteliale bronșice umane normale." http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2871553

Editare: am obținut mai multă reputație, așa că acum pot posta mai mult de două linkuri. Iată o recenzie privind semnalizarea TGFb: http://genesdev.cshlp.org/content/14/6/627.full

De asemenea, un link către nivelurile serice ale TGFb: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16845225


Nu cred că există un răspuns unic la această întrebare. Există diferite tipuri de arestare și ar putea exista declanșatori diferiți în funcție de tipul de celulă epitelială.

Chiar și în lucrarea citată Hammond et al, rețineți că efectul serului nu este o arestare imediată. Celulele epiteliale mamare umane (HMEC) ar putea trece deja prin 3 până la 4 pasaje în ser (la scăpări 1:10), conform Introducerii lucrării; îmbunătățirea cu mediul fără ser trebuia să permită 10-20 de treceri. Și chiar în această lucrare, aproape de sfârșitul rezultatelor, veți vedea o diferență între HMEC și keratinocite umane în ceea ce privește răspunsul la calciu; calciul face ca cheratinocitele să se diferențieze și să piardă capacitatea proliferativă, în timp ce HMEC se descurcă cel mai bine la calciu ridicat.

Lucrările recente au dezvoltat modalități care pot permite multor tipuri de celule epiteliale (atât celule normale, cât și celule tumorale) să prolifereze pe termen nelimitat în cultură, în prezența a 5% ser. Inhibarea kinazei Rho-asociată ROCK este critică, la fel și producerea unor factori încă nedefiniți de către fibroblasti alimentatori. Deci, chiar dacă o componentă a serului tinde să ducă la diferențiere sau senescență și stop de creștere, acel efect poate fi evitat.

Rețineți, totuși, că autorii acestei lucrări mai noi numesc celulele tratate în acest fel „reprogramate”, recunoscând că acestea nu sunt aceleași cu celulele epiteliale originale în unele moduri importante. Ceea ce presupune această „reprogramare” este în curs de investigare activă, iar preocupările dvs. cu privire la selecție, adaptare și potențiale artefacte ale culturii sunt foarte importante. Dar chiar dacă acest lucru este considerat un artefact, înțelegerea mecanismelor la locul de muncă ar trebui să producă unele progrese importante în înțelegerea biologiei epiteliale.


Depanarea culturii celulare

Cultura celulară a devenit una dintre cele mai fundamentale tehnici pentru modelarea sistemelor biologice și are o importanță crescândă în sectoarele biotehnologiei și farmaceutice, precum și un proces esențial în laboratoarele de cercetare a științelor vieții. Deși această tehnică este extrem de accesibilă, propagarea cu succes a celulelor pentru extinderea stocului sau experimentele de modelare poate fi afectată de contaminare sau alte condiții care au un impact negativ asupra viabilității celulare. Practica obișnuită de partajare a celulelor a dus la dovezi bine publicate ale contaminării încrucișate a stocurilor de celule a căror identitate a fost anterior necontestată. Identificarea atât a motivelor comune, cât și a celor rare pentru care celulele nu reușesc să prospere poate crește eficiența laboratorului, poate crește randamentul produselor celulare și poate asigura date aval semnificative și fiabile din in vitro modele.


Abstract

Celulele experimentează continuu stres și daune din surse exogene și endogene, iar răspunsurile lor variază de la recuperarea completă până la moartea celulară. Celulele proliferante pot iniția un răspuns suplimentar prin adoptarea unei stări de stop permanent al ciclului celular care se numește senescență celulară. Înțelegerea cauzelor și consecințelor senescenței celulare a oferit perspective noi despre modul în care celulele reacționează la stres, în special stresul genotoxic și modul în care acest răspuns celular poate afecta procesele complexe ale organismului, cum ar fi dezvoltarea cancerului și îmbătrânirea.


INTRODUCERE

Tractul gastrointestinal uman are o suprafață de aproximativ 30 m 2, 1 și lumenul său este colonizat de peste 10 13 bacterii. 2 Epiteliul intestinal are două funcții principale: absorbția nutrienților și a apei și asigurarea unei bariere fizice și chimice împotriva microbiotei luminale. Celulele epiteliale intestinale (IEC) execută funcții importante pentru a ajuta la reglarea homeostaziei imune. Pierderea integrității barierei epiteliale poate duce la translocarea componentelor luminale și poate contribui la descompunerea homeostaziei intestinale observată în anumite tulburări inflamatorii intestinale, cum ar fi bolile inflamatorii intestinale (IBD). 3 Deși s-a demonstrat că IEC exprimă MHC clasa II în urmă cu câteva decenii, importanța funcțională rămâne neclară. În această revizuire, explorăm expresia mecanismului de procesare și prezentare a antigenului de către IEC. Discutăm despre posibilele interacțiuni ale IEC de clasa II + MHC cu celulele T CD4 + și potențialele efecte funcționale asupra imunității și inflamației, precum și diafragma pentru a facilita reînnoirea celulelor stem intestinale (ISC). De asemenea, discutăm despre modul în care eliberarea veziculelor purtătoare de MHC clasa II de către IEC poate modula răspunsurile imune.


Intravasia

Intravasarea, diseminarea celulelor canceroase către organe prin lumenul vasculaturii, este mediată activ sau pasiv. 12,174 Acest lucru depinde de tipul tumorii, microambient și vasculatură. 175 Un model tridimensional microfluidic arată că endoteliul reprezintă o barieră în calea intravasării celulelor tumorale și este reglementat de factori care sunt prezenți în microambientul tumoral. 176 Folosind microscopia cu fluorescență a celulelor vii și o platformă tumorală-microvaselă proiectată de țesuturi, a fost elucidat un mecanism mediat de mitoză prin care celulele tumorale situate de-a lungul periferiei vasului perturbă endoteliul vasului prin divizarea celulară și se detașează în circulație. 177 În plus, constrângerile arhitecturale ale țesuturilor impun anumite presiuni mecanice asupra invadării celulelor tumorale în timpul intravasării. 178 Strângerea nucleară este o provocare deosebită pentru integritatea nucleului celulei invadate. Acest lucru determină apariția rearanjării genomice, ceea ce crește potențialul metastatic. 178

Integrinele sunt receptorii cheie de adeziune celulară care sunt implicați în aproape fiecare etapă a progresiei cancerului de la dezvoltarea tumorii primare până la metastază. 179 Expresia alterată a integrinei este frecvent detectată în tumori, unde integrinele au rolul de a sprijini semnalizarea receptorului factorului de creștere oncogen (GFR) și migrația și invazia celulelor canceroase dependente de GFR. 179 În plus, integrinele reglează procesul de colonizare în locații metastatice prin facilitarea supraviețuirii independente de ancorare a celulelor tumorale circulante (CTC). Celulele metastatice utilizează E-cadherina în siturile metastatice pentru a se detașa, disemina și semăna. 180 Aceasta promovează supraviețuirea celulelor metastatice și blochează apoptoza reactivă mediată de oxigen. 180 Ca atare, inhibarea E-cadherinei în celulele metastatice ale cancerului de sân poate deține potențial terapeutic împotriva cancerului de sân. 180


DIFERENȚE CONCEPTUALE

Pe baza rațiunii pentru efectuarea foametei serice, pot fi identificate cel puțin trei grupe de studii. Înfometarea serului este adesea, cel puțin implicit, considerată ca o procedură de rutină efectuată pentru a pregăti celulele pentru un experiment în condiții fără ser și, prin urmare, nu un experiment în sine (5, 9, 37, 54). Deși serul oferă condiții optime pentru creșterea celulelor, complexul său slab definit și mai ales compoziția variabilă reprezintă un factor de confuzie important și nedorit în timpul efectuării bio-testelor (30, 40, 62, 75). Prin urmare, eliminarea serului din mediul de cultură elimină necunoscutele cunoscute și necunoscute, reduce interferențele analitice și oferă condiții experimentale mai reproductibile (17, 33, 42). Mai mult, aceasta (presupus) reduce activitatea celulară bazală (15) și face populația de celule proliferante mai omogenă, deoarece acestea se retrag din ciclul celular pentru a intra în G în repaus0/ G1 faza (49, 63). Sincronizarea indusă de înfometarea serului, urmată de restimularea serică sau precedată de șocul seric (de exemplu, 50% ser), a fost folosită pe scară largă în cercetarea ciclului celular și a ritmului circadian încă de când Pardee a stabilit conceptul de punct de restricție (4, 47, 72) și a rămas o abordare experimentală importantă și valoroasă (29, 35, 41, 63) în ciuda anumitor rezerve (18). Utilitatea foametei serice depășește biologia moleculară de bază și include cercetarea metabolică, unde introducerea protocoalelor bazate pe foamete serică a relevat răspunsul normal (fiziologic) la insulină în celulele musculare scheletice cultivate, în timp ce încercările anterioare de a studia mecanismele moleculare ale acțiunii insulinei au avut a fost împiedicat de prezența serului (12, 28).

În contrast, mulți cercetători au folosit foamea serică ca instrument pentru a studia mecanismele moleculare implicate în degradarea proteinelor (20, 26), răspunsul la stres celular (3, 36), autofagie, apoptoză (6, 60, 74) și / sau simulează anumite condiții patologice (vezi sfârșitul acestui paragraf). Aceasta este o derivă conceptuală evidentă din abordarea mai orientată tehnic menționată mai sus, unde aceste răspunsuri sunt văzute ca un efect secundar nedorit (17) și cu siguranță nu motivul pentru care se realizează foamea serică. Chiar dacă aceste considerații sunt lăsate deoparte, este clar că, în aceste condiții, foametea serică a trecut acum de la a fi o fază pregătitoare pentru experiment la a fi un experiment în sine („celulele au fost tratate cu foamete serică”) (74). Același lucru este valabil și pentru studiile în care foamea serică în combinație cu hipoxia și / sau conținutul scăzut de glucoză este utilizat ca model experimental pentru a imita afecțiuni clinice precum infarctul miocardic și accident vascular cerebral (7, 11, 25, 70) sau pentru a recrea un nutrient slab vascularizat. -, nucleul tumorilor cu factor de creștere și deficit de oxigen (36, 52, 59).


Sistemul limfatic

Limfa este lichidul apos care scaldă țesuturile și organele și conține celule albe din sânge de protecție, dar nu conține eritrocite. Limfa se deplasează în jurul corpului prin sistemul limfatic, care este alcătuit din vase, conducte limfatice, glande limfatice și organe, cum ar fi amigdalele, adenoidele, timusul și splina.

Deși sistemul imunitar se caracterizează prin circularea celulelor pe tot corpul, reglarea, maturarea și intercomunicarea factorilor imuni apar în anumite locuri. Sângele circulă celulele imune, proteinele și alți factori prin corp. Aproximativ 0,1% din toate celulele din sânge sunt leucocite, care includ monocite (precursorul macrofagelor) și limfocite. Majoritatea celulelor din sânge sunt celule roșii din sânge. Celulele sistemului imunitar se pot deplasa între sistemele circulatorii limfatice și sanguine distincte, care sunt separate de spațiul interstițial, printr-un proces numit extravazare (trecând prin țesutul înconjurător).

Amintiți-vă că celulele sistemului imunitar provin din celulele stem din măduva osoasă. Maturarea celulelor B are loc în măduva osoasă, în timp ce celulele progenitoare migrează din măduva osoasă și se dezvoltă și se maturizează în celule T naumble din organul numit timus.

La maturare, limfocitele T și B circulă către diferite destinații. Ganglionii limfatici împrăștiați pe tot corpul adăpostesc populații mari de celule T și B, celule dendritice și macrofage (Figura 17.3.8). Limfa adună antigene pe măsură ce se scurge din țesuturi. Aceste antigene sunt apoi filtrate prin ganglioni limfatici înainte ca limfa să fie readusă în circulație. APC-urile din ganglionii limfatici captează și procesează antigene și informează limfocitele din apropiere despre potențiali agenți patogeni.

Figura 17.3.8: (a) Vasele limfatice transportă un fluid limpede numit limfă pe tot corpul. Lichidul trece prin (b) ganglioni limfatici care filtrează limfa care intră în nod prin vasele aferente și pleacă prin vasele eferente ganglionii limfatici sunt umpluți cu limfocite care purjează celulele infectante. (credit a: modificare lucrare de către NIH credit b: modificare lucrare de către NCI, NIH)

Splina găzduiește celule B și T, macrofage, celule dendritice și celule NK (Figura 17.3.9). Splina este locul în care APC-urile care au prins particule străine în sânge pot comunica cu limfocitele. Anticorpii sunt sintetizați și secretați de celulele plasmatice activate în splină, iar splina filtrează din sânge substanțele străine și agenții patogeni cu complexe de anticorpi. Funcțional, splina este la sânge, precum ganglionii limfatici la limfă.

Figura 17.3.9: splina funcționează pentru a filtra imunologic sângele și pentru a permite comunicarea între celule corespunzătoare răspunsurilor imune înnăscute și adaptive. (credit: modificarea lucrării de către NCI, NIH)


De ce celulele epiteliale se opresc ca răspuns la ser? - Biologie

Dr. Surinder K. Batra
Profesor
E-mail

Rezumatul cercetării: Ce se întâmplă atunci când o celulă devine o celulă canceroasă? Putem determina modul în care se întâmplă acest lucru, care sunt moleculele importante la nivel molecular? Laboratorul nostru este axat pe determinarea schimbărilor care apar în dezvoltarea celulelor canceroase, în special în stadiile incipiente. Scopul este atât de a determina care sunt caracteristicile importante ale dezvoltării cancerului, cât și de a determina ce molecule ar putea fi markeri precoce importanți ai celulelor tumorale, cu scopul diagnosticului precoce.

Pentru mai multe informații despre Dr. Batra: site-ul web

Dr. Steve Caplan
Profesor
E-mail

Rezumatul cercetării: Celulele interacționează constant cu mediile lor. O formă a acestei interacțiuni pe care o studiem este mecanismul care controlează absorbția receptorilor de la suprafața celulei și a hormonilor pe care aceștia se leagă. Celula are mecanisme elaborate pentru această absorbție și procesul de returnare a acestor proteine ​​de membrană de suprafață celulară înapoi la suprafața celulei. Ne interesează mecanismele moleculare prin care se realizează acest lucru și modul în care acest proces este reglementat.

Pentru mai multe informații despre Dr. Caplan: site-ul web

Dr. Kaustubh Datta
Profesor
E-mail

Rezumatul cercetării: Interesul meu de cercetare de la formarea mea post-doctorală în Centrul Medical Beth Israel Deaconess, Harvard Medical School, Boston, până în prezent este de a studia mecanismele moleculare ale metastazei cancerului. Metastaza este principala cauză de deces legat de cancer. Deși au fost efectuate mai multe studii pentru a înțelege inițierea și progresia tumorilor primare, metastaza rămâne un câmp sub studiat. Prin urmare, este important să se studieze metastazele în detaliu mecanicist și să se descopere căi noi care au implicații terapeutice. Am început să lucrez independent ca profesor asistent la Mayo Clinic, Rochester. M-am mutat la Universitatea din Nebraska Medical Center ca profesor asociat și am devenit profesor. De asemenea, devin membru activ al Buffet Cancer Research. Acum sunt co-conducătorul grupului de focus oncologic GU al Centrului de Cancer Buffet și lucrez îndeaproape cu clinicienii GU Oncologie. Cercetările noastre de aici s-au concentrat pe factorii de creștere angiogenă și pe rolul lor în promovarea progresiei cancerului de prostată și a metastazelor. Lucrăm în special asupra factorului de creștere endotelial vascular-C (VEGF-C) și a receptorului acestuia, neuropilin-2 (NRP-2), în cancerul de prostată și am observat recent un rol nou al acestei axe în traficul endocitar. Am observat că endocitoza îmbunătățită în celulele canceroase de prostată datorită activării axei VEGF-C / NRP2 promovează funcții de promovare a cancerului, cum ar fi autofagia și activarea receptorilor factorilor de creștere, facilitând reciclarea rapidă a acestora către membrana plasmatică. O înțelegere cuprinzătoare a acestei noi funcții a NRP2 ar fi, prin urmare, crucială pentru a dezvolta o terapie eficientă împotriva acestui stadiu agresiv, incurabil al cancerului de prostată.

Pentru mai multe informații despre Dr. Datta: site-ul web

Punita Dhawan, dr.
Profesor Asociat
E-mail

Rezumatul cercetării: Laboratorul meu va avea ocazia ca studenții să facă o rotație de vară studiind mecanismele de reglare a carcinogenezei colonului și să valideze potențialul terapeutic al noilor proteine. Laboratorul meu este axat pe înțelegerea proceselor moleculare de creștere și progresie neoplazică, pentru a ajuta la îmbunătățirea managementului clinic. & # 160Cercetăm modul în care interfața dintre celulele mamiferelor și mediul exterior este modulată în timpul proceselor de boală și semnificația sa cauzală, cu accent special pe proteinele de joncțiune strânse. Laboratorul meu se concentrează în mare măsură pe dezvoltarea de noi molecule terapeutice în reglarea homeostaziei colonului și a tumorigenezei. Am arătat recent un rol nou și inexplorat în prezent al Claudin-1 în reglarea expresiei MMP-9 / Notch, pentru a regla homeostazia epitelială și a dezvolta, de asemenea, un inhibitor de molecule mici și pentru a determina potențialul său terapeutic. În plus, înțelegem rolul joncțional non-strâns al claudinei-7 în interacțiunea celulă-matrice și celulă-celulă. & # 160 Pentru a studia folosim modele de șoarece, in vitro culturi de organoid / tumori de șoarece și modele de cultură celulară.

Pentru mai multe informații despre Dr. Dhawan: site-ul web

Maneesh Jain, dr.
Profesor Asociat
E-mail

Rezumatul cercetării:

Dezvoltarea diagnosticului și a terapiei împotriva cancerului și a bolilor aliate.

Interesul meu a fost să dezvolt strategii bazate pe anticorpi pentru terapia țintită și diagnosticarea bolilor, în special a cancerului. Cercetarea noastră implică dezvoltarea de fragmente de anticorpi modificate genetic pentru îmbunătățirea radioimunoterapiei tumorilor solide. Încercăm să optimizăm radioimunoterapia tumorilor solide modificând designul molecular al fragmentelor de anticorpi și introducând secvențe care vor spori absorbția și / sau reținerea anticorpilor radiomarcați în țesuturile tumorale fără a modifica distribuția lor în țesuturile nețintă. Recent, am demonstrat utilitatea peptidelor cu penetrare celulară în îmbunătățirea fragmentelor de anticorpi cu retenție tumorală. & # 160

Cealaltă zonă a cercetării noastre implică dezvoltarea testelor serice pentru diagnosticarea precoce a cancerului pancreatic letal. Încercăm mai multe abordări pentru a dezvolta teste serice sensibile pe bază de mucină folosind anticorpii pe care i-am generat. În colaborare cu mai multe grupuri, încercăm să dezvoltăm un test multimarker pe bază de nanoparticule pentru diagnosticul precoce al cancerului pancreatic. De asemenea, încercăm să folosim anticorpii pentru a perturba căile de semnalizare mediate de țintele lor pentru intervenția terapeutică și pentru a proiecta anticorpii pentru uz uman. În plus, încercăm să folosim anticorpii și fragmentele de anticorpi pentru administrarea de medicamente încapsulate în nanoparticule către diferite tipuri de cancer. Următoarele proiecte sunt în curs de desfășurare:

  1. Diagnosticul precoce al cancerului pancreatic. Proiectul implică dezvoltarea unor analize serice pe bază de mucină pentru depistarea precoce a cancerului pancreatic utilizând diferite abordări.
  2. Terapie împotriva cancerului de prostată și a altor tipuri de cancer utilizând constructe de anticorpi marcate radioactiv. Suntem interesați de dezvoltarea unui multi-antigen (EGFRvIII, MUC4 și TAG72) radioimunoterapie orientată folosind un cocktail de fragmente de anticorpi.
  3. Studierea implicării căilor de semnalizare modificate în cancer și exploatarea informațiilor despre terapia cancerului. Încercăm să înțelegem rolul (rolurile) factorilor de transcripție a familiei RUNX în patogeneza cancerului pancreatic. Accentul specific se pune pe identificarea genei țintă reglementate de RUNX3 și implicarea acestora în dezvoltarea și progresia cancerului pancreatic.
  4. Studierea implicării semnalizării EGFR modificate în dezvoltarea cancerului pancreatic. Studiem rolul receptorilor EGFR mutanți, în special EGFRvIII, în patogeneza cancerului pancreatic. Aceste studii vor sta la baza dezvoltării de noi strategii terapeutice folosind anticorpi anti-EGFRvIII-specifici pentru țintirea cancerului pancreatic.

Pentru mai multe informații despre Dr. Jain: Website

Ph.D. Sukhwinder Kaur
Profesor asistent
E-mail

Rezumatul cercetării: Letalitatea bolii este dictată de stadiul acesteia în momentul diagnosticului. Dezvoltarea unei semnături combinatorii împreună cu tehnologii ultrasensibile pentru detectarea markerilor este esențială pentru îmbunătățirea diagnosticului și a prognosticului. Studiile mele se concentrează pe dezvoltarea unui panou de diagnostic și prognostic combinat, utilizând semnele modificate asociate genei, proteinelor, metabolice și exosomale. Folosim abordări AI bazate pe învățarea automată pentru descoperirea biomarkerilor, care oferă o precizie ridicată pentru a diagnostica stadiile incipiente ale bolii. În timp ce lucram la biomarkeri, am observat creșterea specifică a glucoproteinei megadalton MUC5AC și MUC5B în stadiul incipient al bolii. Mai mult, creșterea acestor mucine a fost specifică etapei și metastazei, pe tot parcursul progresiei PC. Folosind un set seric cuprinzător (N = 922), am demonstrat că MUC5AC este prezent la niveluri ridicate în sângele pacienților cu cancer pancreatic și are un potențial ridicat ca biomarker de diagnostic și prognostic în combinație cu CA19.9. Mai mult, am identificat o combinație de MUC4, MUC5AC și CA19.9 pentru diagnosticarea precoce a cancerului pancreatic. În continuare, ne concentrăm pe dezvoltarea tehnologiilor sensibile (Spectroscopie Raman îmbunătățită de suprafață) pentru a detecta acest panou multi-marker. Celălalt accent al cercetării mele implică delimitarea mecanismelor moleculare de semnalizare oncogenă de către biomarkeri diferiți în progresia și metastaza diferitelor tumori maligne. Ne concentrăm pe delimitarea semnificației funcționale a genelor MUC și HOX asupra progresiei tumorii, metastazelor și chimiorezistenței. În prezent, studiile se concentrează pe:

  • Dezvoltarea biomarkerilor imagistici pentru depistarea precoce a bolii
  • Identificarea și validarea biomarkerului bazată pe învățarea automată
  • Identificarea suprafeței exosomale, a proteinelor și a semnăturii miARN & # 160 pentru diagnosticul și prognosticul cancerului pancreatic.
  • Meta-analize ale biomarkerilor pentru stratificarea polipului colonic
  • Delimitarea rolului oncogenelor exprimate diferențial în progresia și metastaza cancerului pancreatic.

Pentru mai multe informații despre Dr. Kaur: site-ul web

Ming-Fong Lin, dr.
Profesor
E-mail

Rezumatul cercetării: De ce cresc celulele canceroase necontrolat? & # 160 Încercăm să răspundem la această întrebare în cancerul de prostată. & # 160 Abordarea noastră este de a studia reglarea fosforilării proteinelor, adăugarea unui grup fosfat la proteine. & # 160 Acest lucru este cunoscut pentru a controla activitatea multor proteine ​​celulare importante pentru creșterea celulelor. & # 160 Ne concentrăm pe fosfataza acidului prostatic (PCAP), care poate elimina grupările fosfat din proteine, cu scopul de a încerca să stabilim dacă PCAP este important pentru dezvoltarea cancerului de prostată .

Pentru mai multe informații despre Dr. Lin: site-ul web

Dr. Rebecca Oberley-Deegan
Profesor asistent
E-mail

Rezumatul cercetării: Laboratorul Oberley-Deegan este axat pe înțelegerea rolului pe care îl joacă radicalii liberi în toxicitatea normală a țesuturilor în timpul terapiei împotriva cancerului. Mai exact, ne concentrăm pe atenuarea fibrozei și a toxicităților hematologice asociate cu radiațiile și chimioterapia utilizate pentru tratamentul cancerului. De asemenea, ne interesează rolul pe care îl joacă radicalii liberi în progresia cancerului.

Pentru mai multe informații despre Dr. Deegan: site-ul web

Moorthy P. Ponnusamy, dr.
Profesor asistent
E-mail

Rezumatul cercetării: Cancerul ovarian este o boală extrem de letală care reprezintă o mare provocare clinică în oncologia ginecologică. Este asimptomatică până când boala se află în stadiul târziu, determinând ca aceasta să aibă cel mai mare raport fatalitate-caz dintre toate tumorile maligne ginecologice. Este esențial să se analizeze markerii diagnostici și prognostici pentru cancerul ovarian pentru a gestiona această boală letală. Primul meu scop este să analizez rolul și mecanismul mucinelor legate de membrană (MUC4 și MUC16) în progresia cancerului ovarian. Am arătat recent că MUC4 joacă un rol major în motilitatea celulelor cancerului ovarian și metastaze, în parte, prin modificarea aranjamentului actinei și potențarea semnalizării HER2 în aval în aceste celule. În plus, am identificat că MUC4 joacă un rol în inducerea tranziției epiteliale-mezenchimale (EMT) în celulele cancerului ovarian. Acest lucru se întâmplă prin reglarea ascendentă a expresiei N-caderinei care duce la potențialul metastatic sporit al celulelor cancerului ovarian uman.

Mai mult, pe baza observațiilor noastre că MUC4 interacționează și stabilizează receptorul tirozin kinază ErbB2 (HER2), am emis ipoteza că interacțiunea dintre MUC4 și HER2 ar putea fi cel puțin parțial responsabilă pentru rezistența HER2 care exprimă cancerele de sân la Trastuzumab (Herceptin) . Acest proiect este de a investiga rolul MUC4 în rezistența celulelor cancerului de sân la Trastuzumab și de a identifica mecanismul de bază. Acest proiect explorează o abordare inovatoare pentru a aborda rezistența la Trastuzumab prin vizarea MUC4 în combinație cu ErbB2, care ar trebui să ofere un rezultat sinergic prin demascarea epitopului (mascat de MUC4) și astfel să îmbunătățească potențial rezultatul pentru pacienții cu cancer de sân.

Recent am demonstrat că supraexprimarea MUC4 duce la o populație de celule stem de cancer ovarian îmbogățit fie direct, fie indirect prin HER2. Mai mult, investigăm consecința biologică și proprietatea de rezistență la medicamente a stabilizării mediate de MUC4 a HER2 în celulele stem ale cancerului ovarian și efectul său asupra patogeniei cancerului ovarian. În viitor, acest studiu ar fi util pentru terapia orientată pe MUC4 pentru populația de celule stem de cancer ovarian.

Rolul și mecanismul hPaf1 / PD2 în celulele stem canceroase:& # 160 Al doilea obiectiv al meu este să identific și să caracterizez populațiile de celule stem canceroase din diferite tipuri de cancer. În ultimii câțiva ani, s-a identificat că o populație mică (mai puțin de 5%) de celule canceroase, denumită & # 8220 Celule stem canceroase (CSC) & # 8221 sau & # 8220 celule de populație laterale (SP) & # 8221, este responsabil pentru agresivitatea, metastaza și rezistența celulelor cancerului ovarian la terapie. Pe baza studiului nostru anterior cu privire la rolul factorului 1 de asociere a polimerazei umane / diferențierea pancreatică 2 (hPaf1 / PD2) în menținerea auto-reînnoirii în celulele stem embrionare de șoarece, presupun că hPaf1 / PD2 poate juca un rol în reglarea reînnoirea CSC-urilor. Acest proiect urmărește să investigheze rolul și mecanismul unei noi molecule hPaf1 / PD2 în celulele stem canceroase. Identificarea markerului specific hPaf1 / PD2 al celulelor stem canceroase și rolul său în întreținerea CSC ar furniza informații extrem de importante, care sunt esențiale în avansarea către obiectivul pe termen lung al dezvoltării unor strategii terapeutice noi pentru populația de celule stem canceroase. & # 160

Pentru mai multe informații despre Dr. Rachagan: & # 160Website

Dr. Satyanarayana Rachagan
Profesor asistent
E-mail

Rezumatul cercetării: & # 160Cercetările mele de laborator se concentrează în principal pe următoarele domenii: & # 160

  1. Identificarea semnăturii miARN pentru diagnosticul și prognosticul cancerului pancreatic & # 160
  2. Studiați rolul mucinelor în patogeneza cancerului pancreatic și colorectal folosind modele de șoarece și celule modificate genetic. & # 160
  3. Chimioprevenție și noi terapii combinate pentru cancerul pancreatic și colorectal. & # 160
  4. Modificări ale microbiomului mediate de dietă în boala inflamatorie intestinală & # 160
  5. Metabolismul cancerului în cancerul pancreatic & # 160

Pentru mai multe informații despre Dr. Rachagan: site-ul web

Dr. Amar Singh
Profesor Asociat
E-mail

Rezumatul cercetării: Cercetarea noastră se concentrează pe înțelegerea angajamentelor moleculare ale bolii inflamatorii intestinale, a cancerului colorectal și renal, cu accent special pe reglarea transformării neoplazice a celulelor epiteliale și a conversației între homeostazia epitelială și imună. Am generat noi linii de șoareci modificate genetic, modele inovatoare de șoarece de IBD și cancer asociat colitei și am stabilit in vitro cultura organelor în urmărirea studiilor noastre. În plus, dezvoltăm organoizi derivați de pacienți și xenogrefe tumorale din stadiile cunoscute ale bolii și răspuns terapeutic variabil și capacitatea de analiză longitudinală a carcinogenezei asociate IBD în cancerul de colon genetic sau indus chimic folosind endoscopul de șoarece Carl-Storz.

Pentru mai multe informații despre Dr. Singh: site-ul web

Paul L. Sorgen, dr.
Profesor
E-mail

Rezumatul cercetării: Celulele una lângă alta într-un țesut formează conexiuni intercelulare puternice. & # 160 O formă a acestor conexiuni sunt joncțiunile de decalaj, care formează pori care pot permite trecerea moleculelor mici de la o celulă la vecina ei. & # 160 Studiem una a moleculelor care sunt importante pentru formarea joncțiunilor gap, conexinele. & # 160 Scopul nostru este să înțelegem structura moleculară a conexinelor și modul în care acestea reglează formarea joncțiunilor gap și comunicarea intercelulară.

Pentru mai multe informații despre Dr. Sorgen: & # 160Website

Dr. Justin Mott, dr.
Profesor Asociat
E-mail

Rezumatul cercetării: Leziunile și inflamația ficatului sunt părți importante ale bolii hepatice grase nealcoolice. Un proiect din Mott Lab studiază în prezent modul în care acizii grași provoacă leziuni și inflamații în celulele care acoperă căile biliare. Acest proiect implică măsurarea răspunsului celulelor cultivate la acizi grași. Întrebările deschise care sunt studiate includ determinarea naturii semnalizării toxice inițiale de către acizii grași și identificarea strategiilor de protecție pentru a reduce leziunile.

Pentru mai multe informații despre Dr. Mott: site-ul web

Dr. Melissa Teoh-Fitzgerald
Profesor asistent
E-mail

Rezumatul cercetării: De ani de zile oamenii de știință au studiat celulele cancerului de sân în diferite grade pentru a determina de ce și cum se formează, prosperă și comunică între ei și, în unele cazuri, rezistă la tratament. Towards this goal, my group is interested in understanding the stroma cells surrounding the cancer cells in the tumor, such as cancer-associated fibroblasts and cancer-associated macrophages that support the cancer cell. My research will address the following questions:  Why are the stroma cells so important? What role do they play in helping the tumor to survive, thrive, and become more aggressive? And how can these stroma cells be altered to stop the progression of cancer? My lab will look at breast cancer-associated fibroblasts that produce proteins and factors that support the cancer cells in hopes of learning more about them.  Specifically, we will investigate how oxidative stress influences the communication between the cancer cells and their surrounding fibroblasts. By looking into the microenvironment of breast tumors, we hope this leads to targeted therapies that attack not only the cancer cells but also block the supportive role of fibroblasts.

For more information on Melissa Teoh-Fitzgerald: Website

Ricia “Kate” Hyde, Ph.D.
Assistant Professor
E-mail

Research Summary: In the Hyde lab, we study a subtype of acute myeloid leukemia that is caused by an inversion of chromosome 16. This inversion generates a fusion gene between the transcription factor CBFB and the gene for Smooth Muscle Myosin Heavy Chain, MYH11. The fusion gene is called CBFB-MYH11 and encodes the protein CBFβ-SMMHC. Expression of the fusion protein is the initiating event in leukemogenesis, but its mechanism is not well understood. Using genetic mouse models, tissue culture, and molecular biology techniques, we are studying the gene expression changes induced by CBFβ-SMMHC and the co-factors required for its activity. We are also studying the leukemia stem cell population induced by CBFβ-SMMHC and the factors required for their survival. The long term goal of our laboratory is to identify potential drug targets for the development of new therapies for patients with acute myeloid leukemia.

For more information on Ricia Hyde: Website


University of Nebraska Medical Center
42nd and Emile, Omaha, NE 68198
402-559-4000 | Contact Us


Problem in culturing MCF-7 cell line! - (Feb/28/2005 )

Hi all,
I got some problems in MCF-7 morphology and culturing medium.
My MCF-7 cell line was from ATCC, and its recommended medium is Minimum essential medium (Eagle) with 2 mM L-glutamine and Earle's BSS adjusted to contain 1.5 g/L sodium bicarbonate, 0.1 mM non-essential amino acids and 1 mM sodium pyruvate and supplemented with 0.01 mg/ml bovine insulin, 90% fetal bovine serum, 10%.
However, I used DMEM to replace MEM. Because some papers signed and I think it still grew well and formed domes as ATCC indicated!Neverthless, its doubling time was not as fast as ATCC indicated.Is DMEM not suitable for MCF-7 cells?
Besides, I observed some phenomena in adding insulin!
When adding insulin in medium though the whole culturing, MCF-7 cells formed domes as clusteres. However, when adding insulin in medium after thawing for three weeks without insulin, MCF-7 cells grew epithelial-like and some domes!The latter way is easy to count cell number. Therefore, should I followed ATCC to add insulin to culture MCF-7 cells?

1) MCF7 can be grown in DMEM, but MEM is better.

2) We never normally bother to add insulin for growing MCF7 - just MEM with the extras (FBS, pyruvate etc). Works just fine, and the cells grow quite quickly with an epithelial morphology. Once they get up near confluence, however, loads of them float off - I don't know if this is a consequence of not using the insulin.

So, when you don't add insulin til 3 weeks after you've taken them from frozen, they probably have the morphology mine always do.

I suppose whether you add the insulin or not depends on what you want to do with the cells.

I've been growing them in DMEM with 10% FBS, sodium pyruvate, non essential amino acids and insulin.
doubling time is usually increased to the advertised amount if you put in 10nM estrogen.
they float off in insulin as well, when they're overgrown.
just took some out of liquid nitrogen last week, and they're fine.

1)So, you recommend MEM for MCF-7 cells. Do I need to buy another vial cause my MCF-7 cells have been cultivated in DMEM within ten passages?

2)My MCF-7 cells grow more quickly with an epithelial morphology than with domes morphology. And those floating MCF-7 cells may be the result of adding insulin! [Motility response to insulin-like growth factor-I (IGF-I) in MCF-7 cells is associated with IRS-2 activation and integrin expression.
Breast Cancer Res Treat. 2004 Jan83(2):161-70.] Besides, I got some statements from ATCC product information sheet that most of the clusters remain in suspension until after the 2nd subculture. I found the floating MCF-7 cells alive morphology. However, I didn't collect them in subcultivation. Nevertheless, some MCF-7 cells become floating again! So I think this phenomenon is associated with adding insulin!

3) As far as my research, I exert myself to look for new therapeutics in treating breast cancer. Therefore, I hope what I've screened are meaningful to progress in the future study!

I've been growing them in DMEM with 10% FBS, sodium pyruvate, non essential amino acids , 3.7g/L NaHCO3 (but culture in 5% CO2) and 10 microgram/mL insulin. Is the amount of NaHCO3 improper for the growth of MCF-7 cells?
Besides, did u put them in 10nM estrogen to increase the doubling time and how long did they double if without estrogen but with insulin?

Hi,
The media recipie i have for MCF-7 cells is
DMEM to 50mL
FCS (10%) 5mL
Sodium pyruvate (1mM) 500uL
Insulin (10ug/mL) 500uL
Non essential aa (0.1mM) 500uL
Antibiotic/mycotic (1X) 500uL

With 10nM estrogen, there was about 3-4 times more cells than without estrogen. This is from memory, but there was a huge fold increase. Some media recipies recommend adding estrogen. If the media you're using is phenol red free, this also reduces the cell growth rate, because the chemical structure of phenol red is similar to estrogen, and the cells respond accordingly.

It sounds like the amount of NaHCO3 in the medium is not the point, is it?

Besides, I add 10 ug/mL insulin in the medium followed by manufacturer's instructions which is different from yours.

Moreover, did u add estrogen and insulin in the medium at the same time?

Incidentally, I used the medium with phenol red and had read associated references as u mentioned.

Thank you for your cherish opinions!
wuahaha

estrogen and insulin the media at the same time.

using insulin seems to depend on what your working on, and probably habit of the researcher.

i add in 500uL of 10ug/mL insulin into the 50mL final volume. what do you do?

sodium pyruvate is candy to the cells (apparently they can become addicted to it!).

grow my MCF-7 in DMEM 10% FCS, penstrep, fungizone and b-mercaptoethanol. Don't add any insulin or non-essential amino acids. Do you think this will be a problem?

I used Eagle's Minimum Essential Medium containing
Earle's Balanced Salt Solution and non-essential amino acids
1 mM sodium pyruvate
2 mM L-glutamine
1500 mg sodium bicarbonate/L

supplemented with 10% FBS and antibiotics without estrogen and insulin, and they are happy.


Platinum-induced kidney damage: Unraveling the DNA damage response (DDR) of renal tubular epithelial and glomerular endothelial cells following platinum injury

Background: Platinum compounds are potent anticancer drugs but also evoke considerable normal tissue damage. Here, we elucidate the molecular mechanisms contributing to the nephrotoxic effects of cisplatin.

Methods: We comparatively investigated the stress responses of rat kidney tubular (NRK-52E) and glomerular cells (RGE) following treatment with cisplatin (CisPt), oxaliplatin (OxaliPt) and carboplatin (CarboPt). To this end, cell viability, apoptosis, cell cycle progression, DNA damage response (DDR) and repair of DNA adducts were investigated.

Rezultate: CisPt reduced the viability of tubular NRK-52E and glomerular RGE cells most efficiently. Cytotoxicity evoked by CarboPt occurred with a delay, which might be related to a retarded formation of Pt-(GpG) intrastrand crosslinks. RGE cells were more sensitive towards all platinum compounds than NRK-52E cells. Platinum drugs efficiently induced caspase-mediated apoptosis in tubular cells, while RGE cells favored G2/M arrest when treated with equitoxic platinum doses. Mitotic index of NKR-52E and RGE cells was worst affected by OxaliPt. Activation of the DDR was strikingly agent- and cell type-specific. Most comprehensive and substantial stimulation of DDR mechanisms was provoked by CisPt. Repair of Pt-(GpG) intrastrand crosslinks was best in RGE, which was reflected by high mRNA expression of nucleotide excision repair (NER) factors.

Conclusions: There are substantial differences regarding the cause of sensitivity and mechanisms of DDR between tubular and glomerular cells following platinum injury. CisPt is the most potent stimulator of the DDR. We hypothesize that specific DNA adducts and thereby forcefully activated pro-toxic DDR mechanisms contribute to the exceptionally high acute nephrotoxicity of CisPt.

Cuvinte cheie: DNA damage response Nephrotoxicity Normal tissue damage Platinating anticancer drugs.


Priveste filmarea: Бумажными трубочками по пластиковой канве!!! (Noiembrie 2021).