Informație

Efectul supraexprimării unei singure gene în răspunsul celulei


Care sunt factorii care modifică expresia generală diferențială a genei prin introducerea unui vector pentru supraexprimarea unei singure gene?

Dacă supraexprimați o genă pentru o proteină implicată în transducția semnalului (de exemplu, o kinază, schelă sau receptor) prin transfecție de celule vectoriale, atunci suprasolicitați celula folosind această cale de semnalizare, este util să izolați calea și să le studiați.

Există vreo modalitate de a modifica expresia generală a genei sau modelul de expresie diferențială a celulei prin transfecție genică? Cred că acest lucru ar funcționa dacă ați furniza o genă pentru supraexprimarea proteinelor implicate în procesarea ARN-ului (de exemplu, îmbinarea, proteinele ribozomale etc.), transcrierea ARN-ului (de exemplu, TF) sau traducerea proteinelor.


Care sunt factorii care modifică expresia generală diferențială a genei prin introducerea unui vector pentru supraexprimarea unei singure gene

Aceasta este o întrebare foarte relevantă, iar domeniul biologiei experimentale trebuie să revizuiască strategiile experimentale.

Una dintre explicațiile pe care le-ați dat este corectă - proteina supraexprimată ar putea suprascrie procesele celulare.

O altă problemă la care apare această practică este inferența incorectă. Suntem în principal interesați să știm ce face o proteină într-o celulă în condiții fiziologice generale. Dacă stoichiometria este modificată, rezultatele greșite vor apărea cu siguranță. De exemplu, în cazul unui represor / activator cu mai multe ținte: la concentrația sa fiziologică generală este posibil să nu activeze gena-X din cauza afinității scăzute, dar în concentrații mari poate să fie și ajungem la concluzia că gena-x este o țintă a represor-1 printr-un experiment OVEREXPRESSION.

O abordare biologică sintetică este foarte bună în studierea semnalizării / transcripției mici module. Întregul modul poate fi clonat și exprimat într-o celulă sub un promotor inductibil / constitutiv. Acest lucru poate fi implementat și într-o celulă heterologă. Un model matematic ajută în general la realizarea anumitor predicții.

Alte strategii care pot fi utilizate în loc de supraexprimare:

  1. folosind construcții de senzori care adăpostesc site-uri țintă funcționale sau nefuncționale în loc să supraexprime proteina din amonte
  2. experimente de reglare descendentă

Există o mulțime de vectori de supraexpresie diferiți (de obicei sunt promotori / elemente de reglare în amonte de gena transfectată). Iată un exemplu de vector de supraexpresie (vectorul de supraexpresie pCAMBIA1300S) care a fost utilizat pentru supraexprimarea unui factor de transcripție numit NAC în orez, rezultând modificări fenotipice mari (toleranță la secetă și sare): http://www.ncgr.ac.cn/articles /2009ZhenXN_NAC.pdf


Priveste filmarea: Materialul genetic, cromozomi, gene, ADN, cariotip (Ianuarie 2022).